HPTLC 通用混標 (UHM): 高效薄層色譜系統(tǒng)適用性測試 (SST) 新思路
“在 HPTLC 系統(tǒng)中，每張板都代表一個新的分析體系。每次進行分析操作當天，在每個板上都應執(zhí)行 SST，以驗證其是否符合實驗條件要求。SST 通常僅適用于包含預設限值在內(nèi)的單個方法。如果 SST 失敗，則樣品檢測數(shù)據(jù)無效，無法進行評估。”?
在高效薄層色譜 (HPTLC) 中，應用合適的系統(tǒng)適用性測試 (SST) 在每個薄層板上對分析系統(tǒng)進行驗證非常重要，是數(shù)據(jù)有效性的前提，一般是選擇幾個具有特定分析方法的化學對照物質(zhì)作為參考。但目前常用的 SST 實驗設計具有一定的局限性，列舉《美國藥典》和《歐洲藥典》中關于 SST 的描述內(nèi)容可見下表：
SST 新思路
HPTLC 通用混標
針對上文列出的局限性，UHM 應運而生，可用于在常規(guī)分析中驗證 HPTLC 結(jié)果，實現(xiàn)對 HPTLC 色譜圖的整個?RF?范圍進行驗證。
什么是 UHM ？
UHM, the Universal HPTLC Mix，即高效薄層色譜通用混標，由 8 種不同性質(zhì)的化合物組成，廣泛適用于各種 HPTLC 方法的 SST 測試。
HPTLC 通用混標 (UHM) 的開發(fā)
01. 物質(zhì)的選擇
選擇的物質(zhì)最好具有安全、穩(wěn)定、無需衍生化即可檢測、易于獲得且價格低廉等特點。據(jù)此，實驗人員從數(shù)以千計的物質(zhì)列表中，選擇了 24 種化合物。
針對這 24 種化合物在 HPTLC 板上的色譜行為進行研究，分別用 20 種不同展開劑進行洗脫，涵蓋盡量廣泛的極性和選擇性，最終從中選擇了 8 種化合物：鳥苷、舒利苯酮、胸苷、撲熱息痛、鄰苯二甲酰亞胺、氫芴、噻噸酮和 2-苯并三唑四甲基丁基苯酚。?
02. 評估響應特性
相對濕度對每種物質(zhì)的選擇性有不同的影響。當板的活性偏離預期的相對濕度 0 – 5%、33%、75% 或 100% 時，UHM 的響應特性可以清楚地檢測出這些偏離。
對甲苯-乙酸乙酯 90:10 (V/V) 的展開劑組成施加每種組分溶劑 ±10% 的變化，用 UHM 獲得的 HPTLC 指紋圖譜有顯著反應。
針對相同的展開劑進行不同飽和參數(shù)設置的考察（不飽和、部分飽和和充分飽和)。結(jié)果表明，部分飽和?RF?值相對增加，而完全飽和?RF?值相對降低，UHM 可以檢測飽和操作的一般影響。?
03. 評估 UHM 性能
分別在實驗室內(nèi)和實驗室間進行檢測，使用 3 種展開劑并得出 ΔRF，評估 UHM 性能。
在實驗室內(nèi)試驗中，ΔRF?為 0.029; 實驗室間試驗為 0.040。
04.?評估不同類型的硅膠薄層板
在色譜系統(tǒng)中薄層板的材料是一個關鍵參數(shù)。由于硅膠的規(guī)格不同，例如不同的粘合劑或熒光指示劑的存在，不同的薄層板可能會有不同的選擇性。?
使用 UHM 評估了 6 種不同類型的涂敷型硅膠薄層板，使用相同的展開劑，乙酸乙酯-甲酸-乙酸-水 100:11:11:26 (V/V)。
UHM 與現(xiàn)行 SST 比較
使用 UHM 和現(xiàn)行的 SST 進行精油標準鑒別。
在原有方法中乙酸異丁香酚 [1a] 和異丁香酚 [1b] 被定義為 SST。作為特定標記物，使用的是芳樟醇和乙酸芳樟酯，或冰片和乙酸冰片酯。在這個例子中，還測試了 3 種精油：薄荷油、薰衣草油和肉豆蔻油。
針對 UHM 和當前 SST 的每個成分，計算平均?RF?值及其預測區(qū)間。下圖數(shù)據(jù)表明，UHM 成分的預測區(qū)間與原始 SST 的預測區(qū)間在同一范圍內(nèi)。
總結(jié)
HPTLC 通用混標 (UHM) 是當前 SST 的一個很好的替代方法。
8 種不同極性、不同化學類別組分的混合物價格低廉、穩(wěn)定，對驗證色譜系統(tǒng)的變化具有良好的響應性。
與當前的 SST 相比，UHM 的成分顯示出與已建立的 SST 的物質(zhì)和特定標記物具有相似的預測區(qū)間。
UHM 可以檢測展開劑梯度的變化或飽和效應，而許多已建立的 SST 通常只能描述有限的?RF?范圍。
會議內(nèi)容重溫
由此可見，高效薄層色譜越來越受實驗人員的關注，原因不單在其快速、直觀、自由衍生的技術(shù)優(yōu)勢，而且適用于復雜成分樣品的分離及檢測。從以上案例中，通過通用混標的應用，簡化 SST 方法開發(fā)周期，有效保證 HPTLC 在常規(guī)分析檢測中的數(shù)據(jù)重現(xiàn)性、有效性和可靠性。
CAMAG HPTLC PRO 全自動色譜系統(tǒng)實現(xiàn)連續(xù)多板之 “點樣 – 展開 – 衍生 – 檢測 – 分析 – 報告” 操作流程，是新一代的高效薄層色譜的領先技術(shù)。